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[高分] 学位论文 13C标记实验辅助的红霉素工业生产菌代谢机制分析
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13C标记实验辅助的红霉素工业生产菌代谢机制分析 洪铭 华东理工大学 摘要:红霉素是一种重要的的大环内酯类广谱抗生素,它具有重要的应用价值。红色糖多孢菌是红霉素的主要工业生产菌。尽管红色糖多孢菌的基因组测序已经完成,在菌株基因改造和发酵过程培养工艺优化等方面开展了大量研究,但由于对红色糖多孢菌胞内代谢机制的了解不清楚,造成基因改造与发酵工艺优化相互脱节。新构建的菌株,往往需要从头开始优化培养工艺。在优化过程中发现的线索,又难以直接用于指导下一轮的基因改造。这些问题的存在,导致难于高效提高红霉素产量。本论文首先建立了适用于红色糖多孢菌代谢研究的13C分析平台,包括代谢模型的构建、胞内代谢物可靠获取方法、胞内代谢物浓度及同位素丰度精确分析方法。然后利用该分析平台,初步探讨了添加脯氨酸对红色糖多孢菌代谢的影响,深入分析了正丙醇的代谢机制,找出有可能提高红霉素产量的基因改造靶点,并通过新菌株的构建,验证了基因改造靶点的有效性。首先,建立了红色糖多孢菌代谢物组分析方法。比较并验证了各种胞内代谢物的提取方法的有效性,并通过对红霉素发酵过程中的胞内代谢物浓度的变化进行分析,发现了红霉素合成与胞内代谢物浓度之间的关系。研究结果表明液氮研磨法适合于胞内辅酶A类物质和磷酸糖的提取;... 更多 关键词: 红色糖多孢菌;红霉素;正丙醇;13C代谢通量分析;代谢物组分析; 专辑: 工程科技Ⅰ辑 专题: 一般化学工业 分类号: TQ927 导师: 储炬;黄明志 学科专业: 发酵工程 博士电子期刊出版信息: 年期:2018年第08期 网络出版时间:2018-07-16—2018-08-15 |
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