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A comparison between analytical approaches for molecular weight estimation of proteins with variable levels of glycosylation

糖基化 变量(数学) 化学 估计 生物系统 生物化学 计算生物学 数学 生物 工程类 数学分析 系统工程
作者
Amita Puranik,Marianne Saldanha,Prajakta Dandekar,Ratnesh Jain
出处
期刊:Electrophoresis [Wiley]
卷期号:43 (11): 1223-1232 被引量:2
标识
DOI:10.1002/elps.202200027
摘要

Abstract Biotherapeutics, such as mAbs and fusion proteins, are a major and rapidly growing class of pharmaceuticals. Majority of the biopharmaceuticals are glycoproteins, wherein about 1 to 30% of their molecular weight (MW) are contributed by the glycans. Determination of MW of heavily glycosylated proteins, such as Fc‐fusion proteins, is seriously hampered by the physicochemical characteristics and heterogeneity of the attached carbohydrates. Glycosylation influences the expected size of the glycoprotein, which leads to disproportionate MW estimation, in size‐dependent methods. Hence, in this study, we have demonstrated the advantages and limitations of four widely used MW estimation techniques for three proteins having varying levels of glycosylation. It was proven that glycosylation had least impact on MW determination by SEC‐MALS and SV‐AUC. However, MW estimation by LC‐MS and SDS‐PAGE was extensively hampered by the degree of glycosylation. It is, thus, essential to consider the structural characteristics of proteins while selecting a technique for determining their MW.
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