亲爱的研友该休息了!由于当前在线用户较少,发布求助请尽量完整地填写文献信息,科研通机器人24小时在线,伴您度过漫漫科研夜!身体可是革命的本钱,早点休息,好梦!

New Red Fluorescent Calcium Indicators for Functional Analysis of GPCRs and Ca2+ Channel Targets

荧光 绿色荧光蛋白 化学 流式细胞术 生物学中的钙 转染 细胞生物学 生物物理学 钙信号传导 胞浆 共焦显微镜 荧光显微镜 生物化学 细胞内 生物 分子生物学 基因 物理 有机化学 量子力学
作者
Qin Zhao,Haitao Guo,Ruogu Peng,Jixiang Liu,Jinfang Liao,Zhenjun Diwu
出处
期刊:Biophysical Journal [Elsevier BV]
卷期号:116 (3): 240a-240a 被引量:1
标识
DOI:10.1016/j.bpj.2018.11.1315
摘要

The intercellular calcium flux assay is a widely used in monitoring signal transduction pathways and characterizing GPCRs agonists and antagonists. Most common calcium indicators are green fluorescent and difficult for using with GFP and YFP transfected cells or tissues, so red fluorescent calcium indicators are highly desirable. Although Rhod-2 is commonly used for multiplexing with GFP-transfected cells, the higher staining background and cellular localization (mostly in mitochondria) limits its applications and makes the rhodamine-based calcium dyes less sensitive. In this study, two new red fluorescent calcium indicators, Calbryte 590 and Calbryte 630, were developed for monitoring Ca2+ flux assays in living cells with Ex/Em= 580/592 nm and Ex/Em=608/624nm, which are red-shifted wavelength than Rhod-2 with no overlap with FITC filters. In this study, the performance of Calbryte 590 and Calbryte 630 was evaluated with different receptor signaling pathways using HEK-293, CHO-M1 and CHO-K1 cell lines with fluorescence microscope, microplate reader and flow cytometer. The fluorescence imaging data showed that Calbryte 590 and Calbryte 630 uniformly bind to cytosolic calcium ion. The microplate assay results showed that unlike Rhod-2, which requires the presence of organic anion transporter inhibitor (e.g. probenecid) to prevent the leakage of the indicators during dye loading, Calbryte 590 and Calbryte 630 requires minimal amount of probenecid and still has around 5 folds of response over background, which is more than twice higher compared to Rhod-2 assay (S/B ∼2 folds). Calbryte 630 flow cytometry assay results also showed ∼4 folds Ca2+ flux change with APC channel. In conclusion, Calbryte 590 and Calbryte 630 are robust red-shifted fluorescent indicators suitable for multiplexing Ca2+ flux assay in GFP- and YFP-transfected cells or with other green fluorescent dyes with improved cellular retention, brightness and S/B ratio.
最长约 10秒,即可获得该文献文件

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
更新
PDF的下载单位、IP信息已删除 (2025-6-4)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
Ghiocel完成签到,获得积分10
刚刚
6秒前
佟语雪完成签到,获得积分10
6秒前
轻松的惜芹应助喂喂采纳,获得10
10秒前
淳于如雪发布了新的文献求助10
13秒前
LLL完成签到 ,获得积分10
17秒前
yar应助淳于如雪采纳,获得10
18秒前
Koking关注了科研通微信公众号
23秒前
24秒前
淳于如雪完成签到,获得积分20
26秒前
lv发布了新的文献求助10
27秒前
我是老大应助吴嘉俊采纳,获得10
30秒前
31秒前
在水一方应助阿九采纳,获得10
36秒前
36秒前
ZT完成签到,获得积分10
40秒前
搜集达人应助zhouleiwang采纳,获得10
41秒前
吴嘉俊发布了新的文献求助10
42秒前
仙人掌王朝完成签到,获得积分10
44秒前
47秒前
Hello应助zhouleiwang采纳,获得10
47秒前
阿九完成签到,获得积分10
50秒前
lllxxx完成签到 ,获得积分10
51秒前
lv发布了新的文献求助10
52秒前
冉亦完成签到,获得积分10
56秒前
WGS完成签到,获得积分10
57秒前
科研通AI2S应助科研通管家采纳,获得10
58秒前
华仔应助科研通管家采纳,获得20
58秒前
吉吉吉完成签到 ,获得积分10
1分钟前
1分钟前
阿九发布了新的文献求助10
1分钟前
大胆的小懒猪完成签到 ,获得积分10
1分钟前
111完成签到 ,获得积分10
1分钟前
1分钟前
yx_cheng应助001az采纳,获得30
1分钟前
1分钟前
miles完成签到,获得积分10
1分钟前
简单山水发布了新的文献求助10
1分钟前
Yina完成签到 ,获得积分10
1分钟前
友好胜完成签到 ,获得积分10
1分钟前
高分求助中
The Mother of All Tableaux: Order, Equivalence, and Geometry in the Large-scale Structure of Optimality Theory 3000
A new approach to the extrapolation of accelerated life test data 1000
ACSM’s Guidelines for Exercise Testing and Prescription, 12th edition 500
Indomethacinのヒトにおける経皮吸収 400
Phylogenetic study of the order Polydesmida (Myriapoda: Diplopoda) 370
基于可调谐半导体激光吸收光谱技术泄漏气体检测系统的研究 350
Robot-supported joining of reinforcement textiles with one-sided sewing heads 320
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 生物化学 物理 内科学 纳米技术 计算机科学 化学工程 复合材料 遗传学 基因 物理化学 催化作用 冶金 细胞生物学 免疫学
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3990012
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3532049
关于积分的说明 11256153
捐赠科研通 3270925
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1805123
邀请新用户注册赠送积分活动 882270
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 809216