Characterization of an electrogenic sodium/glucose cotransporter in a human colon epithelial cell line

协同运输机 细胞培养 上皮 化学 直线(几何图形) 细胞生物学 生物化学 生物 遗传学 几何学 数学 有机化学
作者
Olivier Délezay,Bernard Verrier,Kamel Mabrouk,J. Van Rietschoten,Jacques Fantini,Jean Mauchamp,Corinne Gérard
出处
期刊:Journal of Cellular Physiology [Wiley]
卷期号:163 (1): 120-128 被引量:22
标识
DOI:10.1002/jcp.1041630114
摘要

Abstract In this study, we have characterized the Na/glucose transporter in polarized monolayers formed by the clonal human colon carcinoma cell line HT‐29‐D4. Isotopic tracer flux measurements show that differentiated HT‐29‐D4 cells possess a sodium‐dependent α‐methyl‐D‐glucopyranoside (AMG) uptake that is competed for by increasing concentrations of D‐glucose, D‐galactose, and phlorizin. This transport is exclusively localized on the apical side of the epithelium. Kinetic data demonstrate the existence of a single Michaelian sodium‐dependent AMG transporter with a Km of 1.2 ± 0.12 mM and a Vmax of 3.24 ± 0.25 nmol/mg of protein per min. Hill analysis reveals a coefficient of 1.9 ± 0.03, consistent with at least two sodium ions involved in AMG transport. Interestingly, the cotransporter function is not modulated by glucose in the culture medium. Transepithelial electrical parameter measurements show that the transepithelial potential difference (Vt) is glucose dependent and phlorizin sensitive. Antibodies directed against a peptide of the rabbit intestinal glucose cotransporter (Ser402‐Lys420) recognize, in western blot experiments, the characteristic bands of the cotransporter on a crude membrane preparation of differentiated HT‐29‐D4 cells and react strongly with the apical domain of the monolayer in immunofluorescence experiments. We conclude that HT‐29‐D4 cells express the sodium/glucose cotransporter SGLT1 at their apical membrane and that this transporter generates the basal transepithelial potential difference. © 1995 Wiley‐Liss, Inc.
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