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A highly sensitive DNA aptamer-based fluorescence assay for sarcosine detection down to picomolar levels

适体 肌氨酸 指数富集配体系统进化 检出限 DNA 化学 荧光 SELEX适体技术 寡核苷酸 线性范围 分子生物学 色谱法 生物化学 生物 氨基酸 核糖核酸 基因 物理 量子力学 甘氨酸
作者
Canan Özyurt,Zeynep Çelik Canbay,Erhan Dinçkaya,Serap Evran
出处
期刊:International Journal of Biological Macromolecules [Elsevier BV]
卷期号:129: 91-97 被引量:23
标识
DOI:10.1016/j.ijbiomac.2019.02.030
摘要

Sarcosine is an amino acid derivative, which is considered as a key metabolite in various metabolic processes. Therefore, simple and sensitive detection methods are needed for further understanding its metabolic role and diagnostic value. In this study, we developed a novel method that meets the need for practical and sensitive detection in a complex medium mimicking urine conditions. For this aim, we selected sarcosine-specific DNA aptamers using graphene oxide-assisted systemic evolution of ligands by exponential enrichment (GO-SELEX). The candidate aptamers were labeled with 6-carboxyfluorescein (6-FAM) at their 5' ends. Two aptamers, namely 9S and 13S produced a significant fluorescence signal upon sarcosine binding. Both aptamers enabled a sensitive analysis with a detection limit of 0.5 pM. The linear detection ranged between 5 pM and 50 μM for 9S aptamer, while 13S aptamer enabled a wider linear detection range between 5 pM and 500 μM. The aptamer-based assay allowed rapid detection with no need for chemical derivatization of sarcosine and sophisticated instruments. Moreover, the aptamer-based assay was free of interference from urea and human serum albumin.
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