检测大肠杆菌( Escherichia coli ) O157:H7免疫磁珠的制备、保存与应用

背景大肠杆菌(Escherichia coli) O157:H7是导致肠出血性大肠杆菌食源性疾病暴发的主要血清型，免疫磁珠(Immunomagnetic beads，IMBS)在E. coli O157的检测中发挥着重要作用，而免疫磁珠的稳定性、特异性、广谱性等性能指标关系着在实际应用中的使用效果。 目的制备高效、稳定且具有广谱性的免疫磁珠，联合分子检测技术如环介导恒温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术、PCR等，提高目标菌的检出率。 方法采用新型的磁珠活化剂MIX & GO制备E. coli O157免疫磁珠，并进行广谱性以及特异性检测；针对6种试剂牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)、酪蛋白(Casein)、海藻糖(Trehalose)、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl pyrrolidone，PVP)、抗坏血酸(Vitamin C)和防腐剂ProClin 300，利用正交试验L18(37)优化免疫磁珠保存液组分；采用IMBS-LAMP、IMBS-PCR、IMBS-生化、菌液-LAMP、菌液-PCR、显色平板-生化鉴定6种方式对20份生猪肉样品进行检测。 结果利用MIX & GO活化剂制备的免疫磁珠捕获率最高达到81.5%±1.3%；免疫磁珠保存液最优配方为：牛血清白蛋白15.0 g/L，酪蛋白10.0 g/L，海藻糖10.0 g/L，PVP 2.0 g/L，抗坏血酸5.0 g/L，ProClin 300 2.5 g/L，保存6个月后免疫磁珠捕获率为75.5%；在20份生猪肉样品的检测中，自制磁珠和商品化磁珠与LAMP联用均检出9例阳性样品；IMBS-LAMP在6种检测方式中具有最高的检测灵敏度，但检出的样品会因磁珠抗体的差异而有所不同。 结论与商品化磁珠相比，实验制备的免疫磁珠具有良好的特异性和广谱性，免疫磁珠-LAMP联用提高了目标菌的检出率，是一种高灵敏度、具有应用前景的检测方法。