A gel electrophoresis-based assay for measuring enzymatic RNA decapping activity

NAD+激酶 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 生物化学 核糖核酸 黄素腺嘌呤二核苷酸 代谢物 鸟苷 化学 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 生物 分子生物学 辅因子 基因 氧化酶试验
作者
Yogeshwari Singh,Jeremy G. Bird
出处
期刊:Methods in Enzymology 卷期号:: 323-350 被引量:1
标识
DOI:10.1016/bs.mie.2022.07.014
摘要

RNA 5' ends are remarkably heterogeneous. In addition to the eukaryotic 5' methyl-7-Guanosine (m7G) cap, a number of primarily metabolite-based cap structures have been identified both in prokaryotic and eukaryotic systems. These metabolite caps include Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD+/NADH), dephosphoCoenzyme A (dpCoA), Flavin Adenine Dinucleotide (FAD), dinucleotide polyphosphates and Uridine diphosphate N-acetylglucosamine (UDP-GlcNAc) (Chen et al., 2009; Kowtoniuk et al., 2009; Wang et al., 2019). The most highly studied of these new cap structures, 5' NAD, has significant effects on RNA stability (Bird et al., 2016; Jiao et al., 2017). Both prokaryotes and eukaryotes have decapping enzymes specific to these metabolite caps and decapping is an integral step in the control of RNA stability (Cahová et al., 2015; Jiao et al., 2017; Sharma et al., 2020; Zhang et al., 2020). To better study how these 5' metabolite RNAs are decapped, we present a method to (1) generate radiolabeled dinucleotide and "full length" 5' capped RNA substrates for use in decapping assays, (2) a simple decapping assay to test the activity of various enzymes on different 5' capped transcripts and (3) a gel electrophoresis-based method for the visualization and differentiation of 5' capped transcripts.
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