One-Step Selective Exoenzymatic Labeling (SEEL) Strategy for the Biotinylation and Identification of Glycoproteins of Living Cells

生物素化 化学 糖复合物 背景(考古学) 糖蛋白 生物素 生物分子 生物化学 重组DNA 计算生物学 基因 生物 古生物学
作者
Tiantian Sun,Seok‐Ho Yu,Peng Zhao,Lu Meng,Kelley W. Moremen,Lance Wells,Richard Steet,Geert‐Jan Boons
出处
期刊:Journal of the American Chemical Society [American Chemical Society]
卷期号:138 (36): 11575-11582 被引量:95
标识
DOI:10.1021/jacs.6b04049
摘要

Technologies that can visualize, capture, and identify subsets of biomolecules that are not encoded by the genome in the context of healthy and diseased cells will offer unique opportunities to uncover the molecular mechanism of a multitude of physiological and disease processes. We describe here a chemical reporter strategy for labeling of cell surface glycoconjugates that takes advantage of recombinant glycosyltransferases and a corresponding sugar nucleotide functionalized by biotin. The exceptional efficiency of this method, termed one-step selective exoenzymatic labeling, or SEEL, greatly improved the ability to enrich and identify large numbers of tagged glycoproteins by LC–MS/MS. We further demonstrated that this labeling method resulted in far superior enrichment and detection of glycoproteins at the plasma membrane compared to a sulfo-NHS-activated biotinylation or two-step SEEL. This new methodology will make it possible to profile cell surface glycoproteomes with unprecedented sensitivity in the context of physiological and disease states.
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