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Purification of Photorhabdus Virulence Cassette (PVC) Protein Complexes from Escherichia coli for Artificial Translocation of Heterologous Cargo Proteins

异源的 大肠杆菌 毒力 大肠杆菌蛋白质类 微生物学 化学 生物 生物化学 基因
作者
Yueying Wang,Xinting Zhang,Xin Feng,Xia Wang,Qi Jin,Feng Jin
出处
期刊:Bio-protocol [Bio-Protocol]
卷期号:14 (1342)
标识
DOI:10.21769/bioprotoc.4966
摘要

Contractile injection systems (CISs), one of the most important bacterial secretion systems that transport substrates across the membrane, are a collection of diverse but evolutionarily related macromolecular devices. Numerous effector proteins can be loaded and injected by this secretion complex to their specific destinations. One group of CISs called extracellular CIS (eCIS) has been proposed as secretory molecules that can be released from the bacterial cytoplasm and attack neighboring target cells from the extracellular environment. This makes them a potential delivery vector for the transportation of various cargos without the inclusion of bacterial cells, which might elicit certain immunological responses from hosts. We have demonstrated that the Photorhabdus virulence cassette (PVC), which is a typical eCIS, could be applied as an ideal vector for the translocation of proteinaceous cargos with different physical or chemical properties. Here, we describe the in-depth purification protocol of this mega complex from Escherichia coli. The protocol provided is a simpler, faster, and more productive way of generating the eCIS complexes than available methodologies reported previously, which can facilitate the subsequent applications of these nanodevices and other eCIS in different backgrounds.
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