人类疱疹病毒6A亚型DR7基因对神经胶质瘤细胞U87增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的：构建含人类疱疹病毒6A亚型DR7基因的慢病毒,研究DR7基因表达对神经胶质瘤细胞U87增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法：PCR扩增DR7基因,克隆至慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP,构建pLenti6.3-DR7-IRES2-EGFP重组慢病毒载体,经293T细胞包装重组病毒转染至神经胶质瘤细胞U87,经blasticidin筛选建立稳定表达株,通过细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞划痕及Transwell实验研究稳定表达DR7基因对U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：成功构建了pLenti6.3-DR7-6×His-IRES2-EGFP慢病毒表达载体,筛选了稳定表达DR7基因的U87-DR7-EGFP细胞株,CCK-8细胞增殖实验显示,稳定表达DR7基因的U87-DR7-EGFP细胞与阴性对照细胞U87-NC-EGFP、U87细胞相比,细胞增殖活性明显增高,差异具有统计学意义（P〈0.001）。细胞周期检测发现U87-DR7-EGFP细胞S、G2/M期细胞所占比例多于U87-NC-EGFP、U87细胞：S期的比例分别为（34.73±1.12）%、（24.89±0.93）%、（25.39±0.96）%,差异具有统计学意义（P〈0.001）;G2/M期分别为（17.35±1.61）%、（11.36±1.50）%、（13.17±1.95）%,差异具有统计学意义（P〈0.05）。细胞划痕实验表明,U87-DR7-EGFP细胞愈合能力明显强于U87-NC-EGFP、U87细胞,划痕6 h愈合率分别为：（33.55±2.83）%、（23.50±3.18）%、（22.03±1.47）%,差异具有统计学意义（P〈0.01）;划痕12 h愈合率分别为（70.50±5.39）%、（53.60±4.67）%、（55.09±2.83）%,差异具有统计学意义（P〈0.001）。Transwell实验表明,U87-DR7-EGFP细胞的穿膜数量明显多于U87-NC-EGFP、U87细胞,分别为：（543.00±22.94）、（387.00±15.63）、（412.00±20.30）个,差异具有统计学意义（P〈0.001）。结论：人类疱疹病毒6A亚型DR7基因表达能在体外促进人神经胶质瘤细胞U87增殖、迁移及侵袭,提示其在神经胶质瘤的发生和发展中可能起一定作用。