测定血清游离胆碱、甜菜碱、三甲胺和胺氧化三甲UPLC-MS/MS

目的 建立超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定血清中游离胆碱、甜菜碱、三甲胺（TMA）和氧化三甲胺（TMAO）浓度。 方法 血清酸化，用乙腈沉淀蛋白和溴乙酸叔丁酯衍生，采用亲水相互作用色谱法（HILIC）分离。以d9 – 氯化胆碱、d9-TMAO、d9- TMA·HCl为内标，流动相为0.1 %甲酸 – 10 mmol甲酸铵水溶液 （A相） 和0.1 %甲酸乙腈（B相），梯度洗脱，质谱检测。 结果 血清中的游离胆碱、甜菜碱、TMA和TMAO得到良好分离，检测浓度线性范围分别为0.391～100，0.782～200，0.009～2.50和0.391～100 μmol/L，相关系数R2 ≥ 0.998 3，日内精密度在6 %以内，日间精密度在10 %以内，4种物质的回收率范围均在90 %～115 %。4 ℃时各物质的浓度变化范围为1.9 %～12.6 %；25 ℃时，胆碱和甜菜碱的浓度变化超过15 %。反复冻融后游离胆碱、甜菜碱和TMAO浓度变化均在15 %内，TMA浓度变化超出15 %。 结论 UPLC-MS/MS法可同时检测血清游离胆碱、甜菜碱、TMA和TMAO的浓度，检测结果具有良好的准确度和精密性。