Optimized Pre-Clinical Grade Production of Two Novel Lentiviral Vector Pseudotypes for Lung Gene Delivery

遗传增强 病毒学 水泡性口炎病毒 病毒载体 生物 逆转录病毒 基因传递 转导(生物物理学) 转基因 向性 分子生物学 病毒 基因 生物化学 重组DNA
作者
María Carla Rosales Gerpe,Laura P. van Lieshout,Jakob M. Domm,Jacob P. van Vloten,Jodre Datu,Joelle C. Ingrao,Darrick L. Yu,Jondavid de Jong,Theo J. Moraes,Peter J. Krell,Byram W. Bridle,Sarah K. Wootton
出处
期刊:Human Gene Therapy [Mary Ann Liebert]
卷期号:31 (7-8): 459-471 被引量:6
标识
DOI:10.1089/hum.2019.211
摘要

Lung gene therapy requires efficient transduction of slow-replicating epithelia and stable expression of delivered transgenes in the respiratory tract. Lentiviral (LV) vectors have the ideal coding, expression, and transducing capacity required for gene therapy. A modified envelope glycoprotein from the Jaagsiekte Sheep Retrovirus, termed Jenv, is well suited for LV-mediated lung gene therapy due to its inherent lung tropism. Here, two novel Jenv-pseudotyped LVs that effectively transduce lung tissue and yield titers similar to the gold standard, vesicular stomatitis virus glycoprotein (VSVg)-pseudotyped LVs, were generated. As the concentration efficiency of LVs was found to depend on envelope pseudotype, a large-scale production method tailored for Jenv-pseudotyped LVs was developed and the most appropriate method of concentration was determined. In contrast to VSVg and Ebola virus glycoprotein-pseudotyped LVs, ultracentrifugation through a sucrose cushion drastically reduced the yield of Jenv LVs, whereas polyethylene glycol precipitation and tangential flow filtration (TFF) proved to be more suitable methods for concentrating Jenv LVs. Importantly, pressure during TFF was found to be crucial for increasing LV recovery. Finally, a unique mouse model was developed to test the suitability of these novel Jenv-pseudotyped LVs for use in lung gene therapy applications.

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