亲爱的研友该休息了!由于当前在线用户较少,发布求助请尽量完整地填写文献信息,科研通机器人24小时在线,伴您度过漫漫科研夜!身体可是革命的本钱,早点休息,好梦!

Real-Time Fluorescent Measurement of Synaptic Functions in Models of Amyotrophic Lateral Sclerosis

突触囊泡循环 突触小泡 神经科学 去极化 神经传递 胞吐 生物 突触 肌萎缩侧索硬化 细胞生物学 化学 生物物理学 小泡 生物化学 医学 病理 受体 疾病
作者
Karthik Krishnamurthy,Davide Trotti,Piera Pasinelli,Brigid K. Jensen
出处
期刊:Journal of Visualized Experiments [MyJOVE]
卷期号: (173) 被引量:3
标识
DOI:10.3791/62813
摘要

Before neuronal degeneration, the cause of motor and cognitive deficits in patients with amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and/or frontotemporal lobe dementia (FTLD) is dysfunction of communication between neurons and motor neurons and muscle. The underlying process of synaptic transmission involves membrane depolarization-dependent synaptic vesicle fusion and the release of neurotransmitters into the synapse. This process occurs through localized calcium influx into the presynaptic terminals where synaptic vesicles reside. Here, the protocol describes fluorescence-based live-imaging methodologies that reliably report depolarization-mediated synaptic vesicle exocytosis and presynaptic terminal calcium influx dynamics in cultured neurons. Using a styryl dye that is incorporated into synaptic vesicle membranes, the synaptic vesicle release is elucidated. On the other hand, to study calcium entry, Gcamp6m is used, a genetically encoded fluorescent reporter. We employ high potassium chloride-mediated depolarization to mimic neuronal activity. To quantify synaptic vesicle exocytosis unambiguously, we measure the loss of normalized styryl dye fluorescence as a function of time. Under similar stimulation conditions, in the case of calcium influx, Gcamp6m fluorescence increases. Normalization and quantification of this fluorescence change are performed in a similar manner to the styryl dye protocol. These methods can be multiplexed with transfection-based overexpression of fluorescently tagged mutant proteins. These protocols have been extensively used to study synaptic dysfunction in models of FUS-ALS and C9ORF72-ALS, utilizing primary rodent cortical and motor neurons. These protocols easily allow for rapid screening of compounds that may improve neuronal communication. As such, these methods are valuable not only for the study of ALS but for all areas of neurodegenerative and developmental neuroscience research.

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
更新
PDF的下载单位、IP信息已删除 (2025-6-4)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
5秒前
5秒前
ling361完成签到,获得积分10
9秒前
Liu发布了新的文献求助10
11秒前
量子星尘发布了新的文献求助10
14秒前
科研通AI5应助Master采纳,获得10
17秒前
Liu完成签到,获得积分20
21秒前
25秒前
Master发布了新的文献求助10
31秒前
39秒前
小名余土土完成签到 ,获得积分10
42秒前
从容的帆布鞋完成签到,获得积分10
49秒前
iwaking完成签到,获得积分10
1分钟前
李爱国应助重要萍采纳,获得10
1分钟前
1分钟前
Master完成签到,获得积分10
1分钟前
1分钟前
panpan发布了新的文献求助10
1分钟前
1分钟前
科研通AI2S应助科研通管家采纳,获得10
1分钟前
量子星尘发布了新的文献求助10
1分钟前
shidandan完成签到 ,获得积分10
1分钟前
2分钟前
2分钟前
panpan关注了科研通微信公众号
2分钟前
2分钟前
背后梦安发布了新的文献求助30
2分钟前
量子星尘发布了新的文献求助10
3分钟前
luna完成签到 ,获得积分10
3分钟前
wanci应助li采纳,获得10
3分钟前
追三完成签到 ,获得积分10
3分钟前
小雨发布了新的文献求助100
3分钟前
科研通AI2S应助科研通管家采纳,获得10
3分钟前
FashionBoy应助科研通管家采纳,获得10
3分钟前
小雨完成签到,获得积分10
3分钟前
4分钟前
li发布了新的文献求助10
4分钟前
4分钟前
星河发布了新的文献求助10
4分钟前
量子星尘发布了新的文献求助10
4分钟前
高分求助中
A new approach to the extrapolation of accelerated life test data 1000
Picture Books with Same-sex Parented Families: Unintentional Censorship 700
ACSM’s Guidelines for Exercise Testing and Prescription, 12th edition 500
Nucleophilic substitution in azasydnone-modified dinitroanisoles 500
不知道标题是什么 500
Indomethacinのヒトにおける経皮吸収 400
Phylogenetic study of the order Polydesmida (Myriapoda: Diplopoda) 370
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 生物化学 物理 内科学 纳米技术 计算机科学 化学工程 复合材料 遗传学 基因 物理化学 催化作用 冶金 细胞生物学 免疫学
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3976649
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3520749
关于积分的说明 11204708
捐赠科研通 3257497
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1798716
邀请新用户注册赠送积分活动 877897
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 806629