Quantification of Small Molecule–Protein Interactions using FRET between Tryptophan and the Pacific Blue Fluorophore

荧光团 费斯特共振能量转移 化学 色氨酸 等温滴定量热法 荧光 小分子 离解常数 生命科学中的荧光 配体(生物化学) 氨基酸 生物化学 量子力学 物理 受体
作者
Molly M. Lee,Blake R. Peterson
出处
期刊:ACS omega [American Chemical Society]
卷期号:1 (6): 1266-1276 被引量:30
标识
DOI:10.1021/acsomega.6b00356
摘要

We report a new method to quantify the affinity of small molecules for proteins. This method is based on Förster resonance energy transfer (FRET) between endogenous tryptophan (Trp) residues and the coumarin-derived fluorophore Pacific Blue (PB). Tryptophan residues are frequently found in proteins near ligand-binding sites, making this approach potentially applicable to a wide range of systems. To improve access to PB, we developed a scalable multigram synthesis of this fluorophore, starting with inexpensive 2,3,4,5-tetrafluorobenzoic acid. This route was used to synthesize fluorescent derivatives of biotin, as well as lower affinity thiobiotin, iminobiotin, and imidazolidinethione analogues that bind the protein streptavidin. Compared with previously published FRET acceptors for tryptophan, PB proved to be superior in both sensitivity and efficiency. These unique properties of PB enabled direct quantification of dissociation constants (Kd) as well as competitive inhibition constants (Ki) in the micromolar to nanomolar range. In comparison to analogous binding studies using fluorescence polarization, fluorescence quenching, or fluorescence enhancement, affinities determined using Trp-FRET were more precise and accurate as validated using independent isothermal titration calorimetry studies. FRET between tryptophan and PB represents a new tool for the characterization of protein-ligand complexes.
最长约 10秒,即可获得该文献文件

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
更新
PDF的下载单位、IP信息已删除 (2025-6-4)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
量子星尘发布了新的文献求助10
2秒前
充电宝应助Jay采纳,获得10
4秒前
orixero应助qp采纳,获得10
6秒前
醍醐不醒完成签到 ,获得积分10
7秒前
gaberella完成签到,获得积分10
8秒前
沐晴发布了新的文献求助150
9秒前
LANER完成签到 ,获得积分10
9秒前
10秒前
xmk完成签到 ,获得积分10
11秒前
cindywu完成签到,获得积分10
11秒前
ccc发布了新的文献求助10
11秒前
13秒前
14秒前
15秒前
15秒前
Star1983发布了新的文献求助10
19秒前
19秒前
坚定馒头发布了新的文献求助10
19秒前
项绝义发布了新的文献求助200
20秒前
Supreme发布了新的文献求助10
22秒前
23秒前
23秒前
25秒前
25秒前
25秒前
27秒前
青柠发布了新的文献求助10
27秒前
nannan发布了新的文献求助10
28秒前
29秒前
29秒前
29秒前
TKTK发布了新的文献求助30
29秒前
Stroeve发布了新的文献求助20
30秒前
34秒前
35秒前
36秒前
38秒前
lelelele发布了新的文献求助10
38秒前
39秒前
ZZZ发布了新的文献求助20
39秒前
高分求助中
A new approach to the extrapolation of accelerated life test data 1000
ACSM’s Guidelines for Exercise Testing and Prescription, 12th edition 500
‘Unruly’ Children: Historical Fieldnotes and Learning Morality in a Taiwan Village (New Departures in Anthropology) 400
Indomethacinのヒトにおける経皮吸収 400
Phylogenetic study of the order Polydesmida (Myriapoda: Diplopoda) 370
基于可调谐半导体激光吸收光谱技术泄漏气体检测系统的研究 350
Robot-supported joining of reinforcement textiles with one-sided sewing heads 320
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 生物化学 物理 内科学 纳米技术 计算机科学 化学工程 复合材料 遗传学 基因 物理化学 催化作用 冶金 细胞生物学 免疫学
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3988920
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3531290
关于积分的说明 11253247
捐赠科研通 3269903
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1804830
邀请新用户注册赠送积分活动 882027
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 809052