Detection of KRAS mutations using double-stranded toehold-exchange probes

克拉斯 化学 生物 突变 计算生物学 遗传学 基因
作者
Wei Xing Zheng,Tianle Ma,Jean‐Luc Coll,Fangming Liu,Honglian Zhang,Yunfei Ma,Zhishuo Wang,Qinghui Jin,Hongju Mao,Jianlong Zhao
出处
期刊:Biosensors and Bioelectronics [Elsevier BV]
卷期号:80: 175-181 被引量:5
标识
DOI:10.1016/j.bios.2016.01.055
摘要

Detection of KRAS mutations in cancer tissues is immensely valuable for the identification of personalized genotype-based therapy. Here, we employed a double-stranded toehold-exchange probe, which is labeled with fluorescent molecules (FAM) and quenchers (Dabcyl), to detect KRAS mutations in cancer tissues. This probe was able to differentiate the intended mutation in a sample containing as little as 5% mutant alleles in a background of wild-type DNA. This probe also performed robustly at a wide range of conditions, for examples, from 4 °C to 37 °C, from 200 mM Na+ to 1 M Na+, and from 200 mM K+ to 500 mM K+. Furthermore, we validated the practicality of this probe in a clinical setting using 8 pairs of cancer tissue samples and their NT (corresponding adjacent nontumorous tissue) samples. All the results generated from the probe detection agreed with those from direct sequencing. Combining features of extreme high specificity and robustness, this probe is a valuable tool for reliable diagnosis of cancer-related mutations.
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