Measuring Phagosomal pH by Fluorescence Microscopy

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作者
Gerone A Gonzales,Johnathan Canton
出处
期刊:Methods in molecular biology [Springer Science+Business Media]
卷期号:: 153-169
标识
DOI:10.1007/978-1-0716-3338-0_11
摘要

Dual-wavelength and dual-fluorophore ratiometric imaging has become a powerful tool for the study of pH in intracellular compartments. It allows for the dynamic imaging of live cells while accounting for changes in the focal plane, differential loading of the fluorescent probe, and photobleaching caused by repeated image acquisitions. Ratiometric microscopic imaging has the added advantage over whole-population methods of being able to resolve individual cells and even individual organelles. In this chapter, we provide a detailed discussion of the basic principles of ratiometric imaging and its application to the measurement of phagosomal pH, including probe selection, the necessary instrumentation, and calibration methods.
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