A novel technique for the measurement of disruption in high‐pressure homogenization: Studies on E. coli containing recombinant inclusion bodies

均质化(气候) 重组DNA 包涵体 大肠杆菌 离心机 细胞破裂 化学 拉伤 色谱法 生物化学 生物 解剖 基因 生态学 生物多样性 物理 核物理学
作者
Anton P. J. Middelberg,Brian K. O'Neill,I. David L. Bogle,Mark A. Snoswell
出处
期刊:Biotechnology and Bioengineering [Wiley]
卷期号:38 (4): 363-370 被引量:61
标识
DOI:10.1002/bit.260380406
摘要

Abstract The high‐pressure homogenization of Escherichia coli , strain JM101, containing inclusion bodies of recombinant porcine somatotropin was investigated. A novel technique employing an analytical disc centrifuge was used to monitor the disruption. This a direct technique which measures cell disintegration rather than soluble protein release. The technique is particularly suited to measurements where the disruption approaches 100%. The disk centrifuge provides a size distribution of the homogenate, and furnishes evidence for the preferential disruption of larger cells. For E. coli containing inclusion bodies, and increase in the cell feed concentration from 145 g/L (wet weight) to 330 g/L resulted is poorer homogenization. Poorer disruption was also obtained by lowering the feed temperature from 20°C to 5°C. Only slight variations in performance were obtained by increasing the feed pH from 7.5 to 9.0 or by storing the feed at 4°C for 24 h prior to disruption. Comparison with uninduced E. coli strain JM101, showed that the disruption obtained is higher for bacteria containing a recombinant inclusion body.
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