Universal Primer‐Multiplex PCR Approach for Simultaneous Detection of Escherichia coli, Listeria monocytogenes, and Salmonella spp. in Food Samples

单核细胞增生李斯特菌 沙门氏菌 多重聚合酶链反应 底漆(化妆品) 大肠杆菌 微生物学 生物 李斯特菌 食品微生物学 聚合酶链反应 病毒学 细菌 化学 基因 遗传学 有机化学
作者
Yanfang Yuan,Wentao Xu,Zhifang Zhai,Hui Shi,Yunbo Luo,Chen ZhuoJun,Kunlun Huang
出处
期刊:Journal of Food Science [Wiley]
卷期号:74 (8) 被引量:50
标识
DOI:10.1111/j.1750-3841.2009.01321.x
摘要

Escherichia coli, Listeria monocytogenes, and Salmonella spp. are 3 kinds of the most important food-borne human pathogens. Traditional microbiological analysis is labor-intensive, time-consuming, and easily contaminated, thus producing false positive signals; it also involves much subjectivity judgments. Multiplex-PCR could be applied to detect multiple target organisms simultaneously to save time and labor, but there is always disproportionate amplification resulting from the disparity of different primers. To gain a rapid and sensitive method, a universal primer-multiplex PCR system (UP-M-PCR) was developed and applied for simultaneous detection of the 3 organisms. This method simplified traditional multiplex-PCR reaction system and overcame its amplification disparities among different primers; moreover, it got a high specificity and sensitivity (85, 155, and 104 copies/reaction for E. coli O157, L. monocytogenes, and Salmonella spp., respectively). Compared with the time-consuming and laborious microbiological analysis, UP-M-PCR had a lower risk of cross-contamination without inoculation and incubation. Test results for 36 food samples showed that UP-M-PCR method got a relative accuracy of 91.77% when compared with traditional microbiological analysis. It could serve as a rapid screening method for pathogen detection and could detect target genes even in dead pathogenic cells. In addition, it has the potential to be performed in an automation mode and might find broader application in simultaneous detection of other multiple pathogens.
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