A novel ligase chain reaction-based electrochemical biosensing strategy for highly sensitive point mutation detection from human whole blood

化学 生物传感器 点突变 检出限 突变体 DNA连接酶 底漆(化妆品) 安培法 色谱法 分子生物学 生物化学 DNA 电化学 电极 基因 生物 物理化学 有机化学
作者
Zhou-Jie Liu,Liang-Yong Yang,Qingxia Wei,Chen-Liu Ye,Xiongwei Xu,Guang‐Xian Zhong,Yanjie Zheng,Jin-Yuan Chen,Xinhua Lin,Ai‐Lin Liu
出处
期刊:Talanta [Elsevier]
卷期号:216: 120966-120966 被引量:16
标识
DOI:10.1016/j.talanta.2020.120966
摘要

Challenged by the detection of trace amounts of mutants and disturbance from endogenous substances in clinical samples, herein, we present a novel electrochemical biosensor based on ligase chain reaction (eLCR) via the thermostable ligase with high mutation recognizing ability. The lengthened double-stranded DNAs exponentially generated via LCR were uniformly distributed on a bovine serum albumin-modified gold electrode, in which the phosphate buffer was tactfully added to remove adsorbed uninterested-probes, and thereafter the amperometry current was collected for the specific binding of streptavidin-poly-HRP and subsequent catalysis in the 3, 3′, 5, 5′-tetramethylbenzidine substrate that contained hydrogen peroxide. It found that, under optimized conditions, the proposed biosensor exhibited a high selectivity of mutant targets from the 104-fold excess of co-existent wild targets within a detection limit of 0.5 fM. Impressively, without the involvement of pre-PCR, the homozygous mutants were specifically distinguished from the wild genotype of CYP2C19*2 allele in human whole blood samples. Therefore, the proposed eLCR, due to its advantages in simple primer design, operational ease and ease of miniaturization, has demonstrated its considerable potential for point-of-care testing in the diagnosis of point mutation-related diseases and personalized medicine.
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