UT-7/EPO细胞培养条件的优化及复壮

目的使复苏后处于衰亡状态的UT-7/EPO细胞恢复正常生长状态,并优化其生长密度。方法通过更换不同培养基（改良的RPMI1640、DMEM和IMDM培养基）、调整血清浓度（10%、15%和20%）、改变生长因子加量（1、3、5 U/ml）及将小鼠腹腔细胞作为饲养细胞与UT-7/EPO细胞共培养,对UT-7/EPO细胞进行复壮。对恢复正常生长状态后的UT-7/EPO细胞,利用CCK-8法绘制细胞生长曲线,并根据生长曲线通过梯度密度培养确定UT-7/EPO细胞在不同培养器皿（48、24、12、6孔板及25 cm2细胞培养瓶）中的最适培养密度。将传代后第2天处于对数生长期的UT-7/EPO细胞冻存及复苏传代3次后,连续培养9 d,检测复壮后UT-7/EPO细胞的初步稳定性。将复壮后UT-7/EPO细胞分别用人源STR试剂及小鼠细胞STR位点进行鉴定。结果更换培养基、改变血清和生长因子加量均不能使衰亡的UT-7/EPO细胞的生长状态有明显改善;饲养细胞与UT-7/EPO细胞共培养可使UT-7/EPO细胞恢复正常生长状态;获得了UT-7/EPO细胞在不同培养器皿中的最适培养密度。复苏后的细胞生长状况良好,与未冻存前的生长状态及活力相当。人源STR位点检测结果显示,复壮后的UT-7/EPO细胞STR图谱均为单个或2等位基因峰,无其他人源细胞的污染;小鼠STR位点检测结果显示,复壮后的细胞未发现饲养细胞的污染。结论饲养细胞能够有效地使UT-7/EPO细胞复壮;最适的细胞生长密度能有效地使细胞维持在稳定、良好的生长状态。