浒苔（Ulva prolifera）遗传转化体系的建立

n n 浒苔（Ulva prolifera）是多细胞大型海洋绿藻，是近年黄海大规模绿潮的唯一优势种，其暴发成灾具有明显的生物学基础。目前已开展广泛深入的研究，获得了大量基因序列并初步注释了功能，亟待建立个体水平基因功能验证的有效方法。建立浒苔遗传转化与稳定表达技术，可为相关研究提供有力工具，同时，也可为构建浒苔重组蛋白高效表达系统奠定基础，发挥浒苔生长速度快、蛋白质含量高、可于封闭水体安全培养的突出优势。 本文从遗传材料、再生方式、转化手段、筛选方法四个方面入手，对浒苔遗传转化体系的构建开展了系统研究： n n 在遗传材料方面，发明了利用水蚤（Tigriopus japonicus）清除杂藻污染的方法，获得了遗传均一的单克隆材料，使用封闭水体充气培养装置实现了藻株的高效营养增殖，为遗传转化研究提供了材料保障，为将来构建安全表达系统创造了条件。 n n 在再生方式方面，分别建立了生殖细胞诱导放散与萌发、营养细胞原位萌发、原生质体酶解制备与再生共三种途经，均能实现浒苔单细胞再生成株，发现了酶解效率的相关性生理生化指标。 n n 在转化手段方面，比较了基因枪法和原生质体介导的玻璃珠法。通过基因枪法检测到报告基因GUS和lacZ在浒苔细胞中的瞬间表达，初步确定浒苔适用的基因枪参数与载体元件。在原位萌发再生苗中检测到了GUS基因的全株表达。 n n 在筛选方法方面，试验了浒苔再生苗对六种抗生素和一种除草剂的敏感性，发现对氯霉素和潮霉素较敏感，对草丁膦非常敏感，统计得到不同处理时间的LD50，发现草丁膦敏感性与光周期明显相关。 n n 本文通过对上述四个方面的系统研究，获得了实验材料、建立了再生方式、实现了基因表达、明确了筛选流程，为后续浒苔稳定表达系统的构建奠定了必要的方法学基础。