Assaying Proteasomal Degradation in a Cell-free System in Plants

泛素 泛素连接酶 Skp1型 F盒蛋白 蛋白酶体 蛋白质降解 细胞生物学 卡林 生物 泛素蛋白连接酶类 细胞分裂控制蛋白4 泛素结合酶 生物化学 基因
作者
Elena García-Cano,Adi Zaltsman,Vitaly Citovsky
出处
期刊:Journal of Visualized Experiments [MyJoVE Corporation]
卷期号: (85)
标识
DOI:10.3791/51293-v
摘要

The ubiquitin-proteasome pathway for protein degradation has emerged as one of the most important mechanisms for regulation of a wide spectrum of cellular functions in virtually all eukaryotic organisms. Specifically, in plants, the ubiquitin/26S proteasome system (UPS) regulates protein degradation and contributes significantly to development of a wide range of processes, including immune response, development and programmed cell death. Moreover, increasing evidence suggests that numerous plant pathogens, such as Agrobacterium, exploit the host UPS for efficient infection, emphasizing the importance of UPS in plant-pathogen interactions. The substrate specificity of UPS is achieved by the E3 ubiquitin ligase that acts in concert with the E1 and E2 ligases to recognize and mark specific protein molecules destined for degradation by attaching to them chains of ubiquitin molecules. One class of the E3 ligases is the SCF (Skp1/Cullin/F-box protein) complex, which specifically recognizes the UPS substrates and targets them for ubiquitination via its F-box protein component. To investigate a potential role of UPS in a biological process of interest, it is important to devise a simple and reliable assay for UPS-mediated protein degradation. Here, we describe one such assay using a plant cell-free system. This assay can be adapted for studies of the roles of regulated protein degradation in diverse cellular processes, with a special focus on the F-box protein-substrate interactions.
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