Isolation of Endocitic Organelles by Density Gradient Centrifugation

密度梯度 分离(微生物学) 细胞生物学
作者
MarianaEÇaGuimarães Araùjo,Lukas Alfons Hube,Taras Stasyk
出处
期刊:Methods in molecular biology 卷期号:: 317-331 被引量:65
标识
DOI:10.1007/978-1-60327-064-9_25
摘要

Advanced prefractionation strategies, in combination with highly sensitive and accurate mass spectrometers provide powerful means to detect and analyze low abundant proteins on the subcellular and organelle-specific level. Among enrichment techniques, subcellular fractionation has become the most commonly used. Its application gives access to less complex subproteomes and organelle constituents, facilitating downstream analysis. Furthermore, subcellular fractionation allows the identification of proteins that shuttle between different subcellular compartments in a stimulus dependent manner. As a paradigm of subcellular organelle isolation, we describe here endosomal purification protocols, based on differential centrifugation in continuous and discontinuous sucrose gradients. Described methods can be easily modified to isolate other organelles and are compatible with subsequent organelle- and functional organelle proteome analyses by, e.g., two-dimensional gel electrophoresis.
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