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Preparation of Herpes Simplex Virus Type 1 (HSV-1)-Based Amplicon Vectors

单纯疱疹病毒 基因 基因组 生物 病毒学 辅助病毒 转基因 遗传学 病毒 放大器 计算生物学 载体(分子生物学) 聚合酶链反应 重组DNA
作者
Cornel Fraefel,Alberto L. Epstein
出处
期刊:Methods in molecular biology [Springer Science+Business Media]
卷期号:: 91-109 被引量:3
标识
DOI:10.1007/978-1-4939-9814-2_5
摘要

Amplicon vectors, or amplicons, are defective, helper-dependent, herpes simplex virus type 1 (HSV-1)-based vectors. The main interest of amplicons as gene transfer tools stems from the fact that the genomes of these vectors do not carry protein-encoding viral sequences. Consequently, they are completely safe for the host and nontoxic for the infected cells. Moreover, the complete absence of virus genes provides a genomic space authorizing a very large payload, enough to accommodate foreign DNA sequences up to almost 150-kbp, the size of the HSV-1 genome. This transgene capacity can be used to deliver complete gene loci, including introns and exons, as well as long regulatory sequences conferring tissue-specific expression or stable maintenance of the transgene in proliferating cells. For many years the development of these vectors and their application in gene transfer experiments was hindered by the presence of contaminating toxic helper virus particles in the vector stocks. In recent years, however, two different methodologies have been developed that allow generating amplicon stocks either completely free of helper particles or only faintly contaminated with fully defective helper particles. This chapter describes these two methodologies.
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