Determination of Copy Number of Foreign Gene in Genome of Pichia pastoris by Real-time Fluorescent Quantitative PCR

毕赤酵母 基因 质粒 生物 标准曲线 绿色荧光蛋白 分子生物学 基因剂量 实时聚合酶链反应 拷贝数变化 基因组DNA 基因组 DNA 遗传学 重组DNA 基因表达 生物化学
作者
Yuanxing Zhang
出处
期刊:Chinese Journal of Biologicals [Changchun Institute of Biological Products]
摘要

Objective To develop a method for determination of the copy number of foreign gene in genome of Pichia pastoris by real-time fluorescent quantitative PCR. Methods The standard curves of GAP and GFP genes were generated with the plasmids containing GAP and GFP genes respectively, and the genomic DNA of P. pastoris transformants containing GFP gene was analyzed by real-time fluorescent quantitative PCR. The copy number of GFP gene in each transformant was calculated with the Ct value of P. pastoris genomic DNA and the standard curve. Results The regression equation of Ct value and logarithm of original copy number of GAP gene was y = -3. 612x + 39. 28, while that of GFP gene was y = -3. 544x + 37. 99. The reaction efficiencies of GFP and GAP genes were 0. 89 and 0. 90 respectively. However, both the correlation coefficients of standard curves of the two genes were 0. 999, and both the curves showed good reproducibility. Of the ten P. pastoris transformants tested, nine contained one copy and one contained multiple copies of GFP gene. Conclusion A real-time fluorescent quantitative PCR method was successfully developed, which might be used for screening of P. pastoris transformants containing various copies of foreign genes.
最长约 10秒,即可获得该文献文件

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
更新
PDF的下载单位、IP信息已删除 (2025-6-4)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
MS903完成签到,获得积分10
2秒前
CJW完成签到 ,获得积分10
3秒前
韧迹完成签到 ,获得积分0
3秒前
mmd完成签到 ,获得积分10
3秒前
七一安完成签到 ,获得积分10
4秒前
浪麻麻完成签到 ,获得积分10
8秒前
包容的剑完成签到 ,获得积分10
12秒前
等待的大炮完成签到,获得积分10
12秒前
注水萝卜完成签到 ,获得积分10
14秒前
Chem34完成签到,获得积分10
22秒前
24秒前
量子星尘发布了新的文献求助10
24秒前
hhh2018687完成签到,获得积分10
24秒前
24秒前
25秒前
25秒前
25秒前
25秒前
26秒前
26秒前
26秒前
26秒前
26秒前
26秒前
26秒前
嘒彼小星完成签到 ,获得积分10
26秒前
26秒前
27秒前
27秒前
27秒前
27秒前
28秒前
ri_290完成签到,获得积分10
28秒前
29秒前
nsc发布了新的文献求助30
31秒前
nsc发布了新的文献求助10
31秒前
nsc发布了新的文献求助10
31秒前
nsc发布了新的文献求助10
31秒前
nsc发布了新的文献求助10
31秒前
nsc发布了新的文献求助10
31秒前
高分求助中
【提示信息,请勿应助】关于scihub 10000
Les Mantodea de Guyane: Insecta, Polyneoptera [The Mantids of French Guiana] 3000
徐淮辽南地区新元古代叠层石及生物地层 3000
The Mother of All Tableaux: Order, Equivalence, and Geometry in the Large-scale Structure of Optimality Theory 3000
Handbook of Industrial Diamonds.Vol2 1100
Global Eyelash Assessment scale (GEA) 1000
Picture Books with Same-sex Parented Families: Unintentional Censorship 550
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 生物化学 物理 内科学 纳米技术 计算机科学 化学工程 复合材料 遗传学 基因 物理化学 催化作用 冶金 细胞生物学 免疫学
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 4038039
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3575756
关于积分的说明 11373782
捐赠科研通 3305574
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1819239
邀请新用户注册赠送积分活动 892655
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 815022