How to use Nile Red, a selective fluorescent stain for microalgal neutral lipids

尼罗河红 荧光 污渍 生物 化学 染色 遗传学 物理 光学
作者
Gibrán S. Alemán‐Nava,Sara P. Cuéllar‐Bermúdez,María Cuaresma,Rouke Bosma,Koenraad Muylaert,Bruce E. Ritmann,Roberto Parra‐Saldívar
出处
期刊:Journal of Microbiological Methods [Elsevier BV]
卷期号:128: 74-79 被引量:63
标识
DOI:10.1016/j.mimet.2016.07.011
摘要

The use of Nile Red for rapid monitoring of the neutral lipid content in microalgae has gained interest over the last decade, since neutral lipids are feedstock for renewable transportation fuel. In this review, we discuss the main considerations needed to make an NR protocol reliable for staining neutral lipids in microalgae. Cell wall permeability must be enhanced by using stain carriers: DMSO (5% v/v to 25% v/v), glycerol (0.1 to 0.125 mg/mL), or EDTA (3.0 to 3.8 mg/mL). Temperatures between 30 and 40 °C facilitate the diffusion of NR through the cell wall without incurring excess quenching. Good NR-lipid interaction requires using a low NR/cell ratio; the NR concentration must be between 0.25 μg/mL and 2.0 μg/mL, and the cell concentration > 5 × 104 cells/mL. In order to have the maximum and stable NR fluorescence, it is necessary to scan the excitation/emission wavelengths for up to a 40-min of incubation time. We outline a five-step method to customize the Nile Red protocol to a specific strain: 1) Evaluate the strain's suitability by checking for the presence of neutral lipid, 2) Select of the best excitation/emission wavelength, 3) Optimization of incubation time, stain carrier, dye concentration, and temperature, 4) Prepare single-strain algal cultures with different lipid contents to calibrate NR fluorescence with neutral-lipid content, and 5) Correlate NR fluorescence intensity to neutral lipid content for the same strain. Once the protocol is customized, the NR method allows for rapid and reliable monitoring of neutral lipid content of a microalgae strain.
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