Identification and Characterization of GDP-D-mannose 4,6-Dehydratase and GDP-L-fucose Synthetase in a GDP-L-fucose Biosynthetic Gene Cluster from Helicobacter pylori

脱水酶 甘露糖 重组DNA 生物化学 酶动力学 生物 岩藻糖 基因 糖蛋白 活动站点
作者
Bingyuan Wu,Yingxin Zhang,Peng George Wang
出处
期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications [Elsevier BV]
卷期号:285 (2): 364-371 被引量:37
标识
DOI:10.1006/bbrc.2001.5137
摘要

In this study two open reading frames namely HP0044 and HP0045 from H. pylori were cloned and overexpressed in E. coli. The two recombinant proteins were demonstrated to have GDP-D-mannose 4,6-dehydratase (GMD) and GDP-L-fucose synthetase (GFS) activities, respectively. The recombinant GMD was a tetramer and had an optimum pH of 6.5. Exogenous NADP+ was essential for its activity. The Km and Kcat for GDP-D-mannose were 117.3 μM and 0.27 s−1, respectively. The recombinant GFS was a homodimer with an optimum pH of 8.0. The Km and Kcat for GDP-4-keto-6-deoxy-D-mannose were 64.08 μM and 0.75 s−1, respectively. It can use both NADPH and NADH, but less efficient with the latter. Amino acid sequence alignment and phylogenetic analysis showed that H. pylori GFS was highly homologous to the GFS of E. coli O111 and both of them were located on a separate phylogenetic branch from other GFS. The unique clustering and origin of the two genes were also discussed.

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