A Bifunctional Amino Acid Enables Both Covalent Chemical Capture and Isolation of in Vivo Protein–Protein Interactions

生物正交化学 双功能 化学 共价键 化学生物学 氨基酸 生物化学 生物结合 二苯甲酮 叠氮化物 组合化学 加合物 点击化学 有机化学 催化作用
作者
Cassandra M. Joiner,Meghan E. Breen,James Clayton,Anna K. Mapp
出处
期刊:ChemBioChem [Wiley]
卷期号:18 (2): 181-184 被引量:31
标识
DOI:10.1002/cbic.201600578
摘要

Abstract In vivo covalent chemical capture by using photoactivatable unnatural amino acids (UAAs) is a powerful tool for the identification of transient protein–protein interactions (PPIs) in their native environment. However, the isolation and characterization of the crosslinked complexes can be challenging. Here, we report the first in vivo incorporation of the bifunctional UAA BPKyne for the capture and direct labeling of crosslinked protein complexes through post‐crosslinking functionalization of a bioorthogonal alkyne handle. Using the prototypical yeast transcriptional activator Gal4, we demonstrate that BPKyne is incorporated at the same level as the commonly used photoactivatable UAA pBpa and effectively captures the Gal4–Gal80 transcriptional complex. Post‐crosslinking, the Gal4–Gal80 adduct was directly labeled by treatment of the alkyne handle with a biotin‐azide probe; this enabled facile isolation and visualization of the crosslinked adduct from whole‐cell lysate. This bifunctional amino acid extends the utility of the benzophenone crosslinker and expands our toolbox of chemical probes for mapping PPIs in their native cellular environment.
最长约 10秒,即可获得该文献文件

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
更新
PDF的下载单位、IP信息已删除 (2025-6-4)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
kc135完成签到,获得积分10
刚刚
2秒前
2秒前
Akim应助EVEN采纳,获得10
3秒前
3秒前
彭于晏应助WJ1989采纳,获得10
3秒前
xiangrikui完成签到,获得积分0
4秒前
江岸与城完成签到 ,获得积分10
5秒前
6秒前
CodeCraft应助董啊采纳,获得10
6秒前
魔力巴啦啦完成签到 ,获得积分10
7秒前
自信雅琴发布了新的文献求助20
7秒前
7秒前
许鑫蓁完成签到 ,获得积分10
7秒前
lulu加油完成签到,获得积分10
8秒前
8秒前
xiangrikui发布了新的文献求助10
8秒前
牛马完成签到 ,获得积分10
9秒前
科研通AI5应助WJH采纳,获得10
10秒前
Zard发布了新的文献求助10
10秒前
王冉冉完成签到,获得积分10
11秒前
ryan1300完成签到 ,获得积分10
11秒前
易拉罐完成签到,获得积分10
11秒前
ZQ完成签到,获得积分10
11秒前
yyds完成签到,获得积分20
11秒前
11秒前
12秒前
彭于晏应助刘宇采纳,获得10
12秒前
13秒前
leeom发布了新的文献求助10
15秒前
Timo干物类完成签到,获得积分10
15秒前
北冥有鱼给北冥有鱼的求助进行了留言
15秒前
15秒前
王冉冉发布了新的文献求助30
15秒前
Ava应助易拉罐采纳,获得10
16秒前
隐形曼青应助无心的土豆采纳,获得10
16秒前
乐于助人大好人完成签到 ,获得积分10
16秒前
ZZQ完成签到,获得积分10
20秒前
量子星尘发布了新的文献求助10
20秒前
Lina HE完成签到 ,获得积分10
20秒前
高分求助中
【提示信息,请勿应助】关于scihub 10000
Les Mantodea de Guyane: Insecta, Polyneoptera [The Mantids of French Guiana] 3000
徐淮辽南地区新元古代叠层石及生物地层 3000
The Mother of All Tableaux: Order, Equivalence, and Geometry in the Large-scale Structure of Optimality Theory 3000
Global Eyelash Assessment scale (GEA) 1000
Picture Books with Same-sex Parented Families: Unintentional Censorship 550
Research on Disturbance Rejection Control Algorithm for Aerial Operation Robots 500
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 生物化学 物理 内科学 纳米技术 计算机科学 化学工程 复合材料 遗传学 基因 物理化学 催化作用 冶金 细胞生物学 免疫学
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 4038569
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3576279
关于积分的说明 11374944
捐赠科研通 3305979
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1819354
邀请新用户注册赠送积分活动 892698
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 815048