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Western Blotting Technique in Biomedical Research

污渍 免疫印迹 硝化棉 分子生物学 聚丙烯酰胺凝胶电泳 凝胶电泳 斑点印迹 十二烷基硫酸钠 化学 生物化学 生物 DNA 基因
作者
Jianuo Liu,James Haorah,Huangui Xiong
出处
期刊:Springer protocols 卷期号:: 187-200 被引量:4
标识
DOI:10.1007/978-1-4614-8794-4_14
摘要

Western Blot is the most important and powerful technique frequently used in laboratory research. It is used to identify specific proteins in biological samples isolated from cells or tissues. Similar to the Southern Blot for DNA and Northern Blot for RNA, the Western Blot procedures rely upon three key elements: the separation of protein mixtures by size utilizing sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, the efficient transfer of separated proteins from the gel to a nitrocellulose or polyvinylidene difluoride membrane, and identification of a target protein via conjugation with specific primary and enzyme-labeled secondary antibodies. This specificity of the antibody–antigen interaction enables a target protein to be identified in the midst of a complex protein mixture. Once detected, an appropriate substrate is then added to the enzyme, and together, they produce a detectable band visible on a blotting membrane, X-ray file, or imaging system. Western Blot is rapid, and simple, enabling easy to interpret, unique, and unambiguous results. Along with other immunoassays, Western Blot is routinely used in research and clinical settings.
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