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Selection and characterization of bispecific aptamers against malachite green and leucomalachite green

适体 指数富集配体系统进化 孔雀绿 化学 离解常数 胶体金 色谱法 组合化学 计算生物学 纳米颗粒 分子生物学 纳米技术 生物 生物化学 基因 材料科学 吸附 受体 有机化学 核糖核酸
作者
Wenwei Wu,Qifeng Sun,Tiansong Li,Kexin Liu,Yan Jiang,Yi Wang,Yongjie Yang
出处
期刊:Analytical Biochemistry [Elsevier BV]
卷期号:658: 114849-114849 被引量:9
标识
DOI:10.1016/j.ab.2022.114849
摘要

In order to develop multi-residues rapid detection, the bispecific aptamers against malachite green (MG) and leucomalachite green (LMG) were isolated by the capture systematic evolution of ligands by exponential enrichment (Capture-SELEX). After thirteen rounds of selection, the enriched ssDNA pools were sent for high-throughput sequencing. Nine aptamer candidates (A1-A9) were picked out to test their specificity by gold nanoparticles (AuNPs) colorimetric assay. Three aptamers (A2, A3, A5) with good selectivity were truncated to verify their affinity by fluorescence assay. Finally, three truncated aptamers (A2-a, A3-a, A5-a) with bispecificity and high affinity were identified. For LMG, the dissociation constant (Kd) of them were 8.4 ± 0.8 nM, 8.2 ± 1.2 nM, and 13.7 ± 1.4 nM, respectively. For MG, Kd of them were 3.4 ± 0.3 μM, 2.3 ± 0.2 μM, 3.0 ± 0.2 μM. Among them, A3-a is the best. Our work will provide novel probes for the development of multi-residues rapid detection as well as opportunities for multiple target aptamer discovery.
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