Using Immunohistochemistry Without Linkers to Determine the Optimum Concentrations of Primary Antibodies for Immunofluorescence Staining of Formalin-fixed Paraffin-embedded Tissue Sections

连续稀释 一级和二级抗体 染色 免疫组织化学 抗体 免疫荧光 病理 医学 分子生物学 化学 生物 免疫学 替代医学
作者
Moses D. Lugos,Gwom Irimiya Davou,Tobias Peter Pwajok Choji,Kizito Jugu,Robert R Ashi,Steve Kunle Oyero,Venkateswarlu Perikala
出处
期刊:Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology 卷期号:28 (3): 249-257 被引量:2
标识
DOI:10.1097/pai.0000000000000718
摘要

The use of immunofluorescence (IF) technique to detect and evaluate expression levels and localization of cellular proteins and other antigens of interest through the antibodies in their cellular or tissue context has become a standard approach among researchers. Optimizing primary antibody concentrations/dilutions is an essential step in the fluorescent antibody staining protocol. The steps in IF staining are similar to those of the immunohistochemistry (IHC) technique. The use of IHC technique to determine the optimal working dilutions of primary antibodies for IF staining of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues sections can minimize time wasting and cumbersome approach of using direct IF single labeling using variable dilutions of both primary and secondary antibodies. We used IHC staining technique to determine the working dilutions of the respective primary antibodies by staining 3-µm sections of recommended positive FFPE tissue sections using 3 different dilutions of the primary antibodies and an isotype control (used at the highest concentration). Digital images of sections stained were reviewed in ImageScope by a Consultant Pathologist for positivity, intensity, and histologic distribution. We adopted the IHC predetermined optimal dilutions of primary antibodies to CD4, CD8, CD16, CD21, CD56, CD68, CD163, FOXP3, and PD1 to carry out IF staining of FFPE tissue sections. This approach has helped to remove the complexities associated with grappling with 2 unknown to optimize for both the primary and secondary antibodies using IF technique.
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