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Development and validation of a hybrid immunoaffinity LC–MS/MS assay for quantitation of total antibody (TAb) from an antibody drug conjugate (ADC) PYX-201 in human plasma

化学 色谱法 分析物 结合 变异系数 选择性反应监测 质谱法 检出限 人血浆 定量分析(化学) 串联质谱法 生物化学 数学分析 数学
作者
Feng Yin,Diana Adhikari,Marlking Peay,Diego Fernando Marmolejo Cortes,Mohammed B. Garada,M. Shane Woolf,Eric Ma,Diane Lebarbenchon,William Mylott,Mike Dyszel,Shawn Harriman,Jan Pinkas
出处
期刊:Journal of Chromatography B [Elsevier]
卷期号:1228: 123844-123844 被引量:1
标识
DOI:10.1016/j.jchromb.2023.123844
摘要

A hybrid immunoaffinity LC-MS/MS assay was developed and validated for the quantitation of total antibody (TAb) from an antibody drug conjugate (ADC) PYX-201 in human plasma. PYX-201 was proteolyzed using trypsin, and a characteristic peptide fragment PYX-201 P1 with ten amino acids IPPTFGQGTK from the complementarity-determining regions (CDRs) was used as a surrogate for the quantitation of the TAb from PYX-201. Stable isotope labelled (SIL) peptide I(13C6, 15N)PPTFG(13C9, 15N)QGTK was used as the internal standard (IS). We performed chromatographic analysis using a Waters Acquity BEH Phenyl column (2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm). Quantification of PYX-201 TAb was carried out on a Sciex triple quadrupole mass spectrometer API 6500 using multiple reaction monitoring (MRM) mode with positive electrospray ionization. To validate PYX-201 TAb, a concentration range of 0.0500 µg/mL to 20.0 µg/mL was used, yielding a correlation coefficient (r) of ≥ 0.9947. For intra-assay measurements, the percent relative error (%RE) ranged from -23.2% to 1.0%, with a coefficient of variation (%CV) of ≤ 14.2%. In terms of inter-assay measurements, the %RE was between -10.5% and -5.7%, with a %CV of ≤ 12.7%. The average recovery of the analyte was determined to be 81.4%, while the average recovery of the internal standard (IS) was 97.2%. Furthermore, PYX-201 TAb demonstrated stability in human plasma and human whole blood under various tested conditions. This assay has been successfully applied to human sample analysis to support a clinical study.
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