Upregulation of miR-200a improves ureteral obstruction-induced renal fibrosis via GAB1/Wnt/β-catenin signaling

Renal fibrosis is a basic pathological change of almost all chronic kidney disorders. Epithelial–mesenchymal transition (EMT) and excessive extracellular matrix (ECM) accumulation play a crucial role in the process of fibrosis. Western blot and qRT-PCR were accomplished to analyze the expression levels of target proteins and genes, respectively. The fibrotic levels in the renal tissues of rats were confirmed utilizing Masson staining. Expression of ECM-related α-SMA in the renal tissues was determined by immunohistochemistry assay. The combination of GRB2 associated binding protein 1 (GAB1) and miR-200a was ensured by starBase database and luciferase reporter assay. Our data uncovered that miR-200a was downregulated, but GAB1 was upregulated in the renal tissues of the rat experienced unilateral ureteral obstruction (UUO). Overexpression of miR-200a improved tissues fibrosis, suppressed GAB1 expression and ECM deposition, and inactivated Wnt/β-catenin in UUO rats. Moreover, miR-200a expression was inhibited, while GAB1 expression was facilitated in the TGF-β1-induced HK-2 cells. In TGF-β1-induced HK-2 cells, miR-200a overexpression inhibited GAB1 expression, also declined ECM-related proteins and mesenchymal markers expression. Oppositely, miR-200a overexpression facilitated epithelial marker expression in the TGF-β1-induced HK-2 cells. Next, the data revealed that miR-200a inhibited GAB1 expression through binding to the mRNA 3′-UTR of GAB1. Increasing of GAB1 reversed the regulation of miR-200a to GAB1 expression, Wnt/β-catenin signaling activation, EMT and ECM accumulation. Overall, miR-200a increasing improved renal fibrosis through attenuating EMT and ECM accumulation by limiting Wnt/β-catenin signaling via sponging GAB1, indicating miR-200a may be a promising objective for renal disease therapy. La Fibrosis renal es un cambio patológico básico en casi todas las enfermedades renales crónicas. La transformación mesenquimal epitelial (EMT) y la acumulación excesiva de matriz extracelular (ECM) juegan un papel vital en el proceso de fibrosis. Western blot y qRT-PCR se utilizaron para analizar los niveles de expresión de proteínas y genes objetivo, respectivamente. La Tinción Masson se utilizó para confirmar los niveles de Fibrosis en el tejido renal de la rata. La inmunohistoquímica detecta la expresión de SMA relacionadas con ECM en el tejido renal. La Unión de la proteína de unión relacionada con GAB1 y miR-200a wa está garantizada a través de la base de datos starbase y el análisis del informe de luciferasa. Nuestros datos muestran que en el tejido renal de las ratas con obstrucción ureteral unilateral (uo), miR-200a wa se redujo, pero gab1 se elevó. La sobreexpresión del miR-200a mejoró la Fibrosis tisular en ratas uuo, inhibió la expresión de GAB1 y la deposición de ECM y inactiva la wnt/β-catenina. Además, la expresión de miR-200a fue inhibida, mientras que la expresión de GAB1 fue promovida en células HK-2 inducidas por TGF-β1. En las células HK-2 inducidas por TGF-β1, la sobreexpresión de miR-200a inhibe la expresión de GAB1 y también reduce la expresión de proteínas relacionadas con ECM y marcadores mesenquimales. Por el contrario, la sobreexpresión de miR-200a promueve la expresión de marcadores epiteliales en células HK-2 inducidas por TGF-β1. A continuación, los datos muestran que miR-200a inhibe la expresión de GAB1 al unirse al arnm 3’-UTR de GAB1. El aumento de GAB1 revirtió la regulación del miR-200a sobre la expresión de GAB1, la activación de la señal de la proteína en cadena Wnt/β-catenin y la acumulación de EMT y ECM. En general, el miR-200a puede ser un objetivo prometedor en el tratamiento de la enfermedad renal al inhibir la transmisión de la señal Wnt/β-catenin, al inhibir la acumulación de EMT y ECM, y al aumentar la mejora de la Fibrosis renal a través de GAB1 esponjoso.