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Quantification of Five Clinically Important Amino Acids by HPLC-Triple TOF™ 5600 Based on Pre-column Double Derivatization Method

衍生化 化学 色谱法 氯化丹酯 氨基酸 质谱法 高效液相色谱法 茚三酮 生物化学
作者
Shuang Deng,D. K. Scott,Uttam Garg
出处
期刊:Methods in molecular biology 卷期号:: 47-53 被引量:6
标识
DOI:10.1007/978-1-4939-3182-8_6
摘要

Phenylalanine, tyrosine, glycine, cystine, and phosphoethanolamine are commonly measured amino acids in various physiological fluids to diagnose or follow-up various inborn errors of metabolism. The gold standard method for the amino acids quantitation has been ion exchange chromatography with ninhydrin post-column derivatization. However, this method is very laborious and time consuming. In recent years, liquid-chromatography mass spectrometry is being increasingly used for the assay of amino acids. Pre-column butyl derivatization with reverse phase chromatography has been widely used for mass spectrometry analysis of amino acids. Phosphoethanolamine is not butylated and cannot be measured by this method. Nevertheless, phosphoethanolamine can be dansyl-derivatized using dansyl chloride. We developed a double derivatization method by using butanol and dansyl chloride to derivatize carboxylic and amino groups separately, and then combining the derivatives to simultaneously measure these five amino acids using TOF-MS scan. Stable isotope-labeled internal standards were used.
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