Isolating Mitochondria, Mitoplasts, and mtDNA from Cultured Mammalian Cells

线粒体 细胞器 生物 细胞生物学 线粒体DNA 膜间隙 生物化学 氧化磷酸化 差速离心 细胞 基因 细菌外膜 大肠杆菌
作者
Katja E. Menger,Thomas J. Nicholls
出处
期刊:Methods in molecular biology [Springer Science+Business Media]
卷期号:: 17-30 被引量:3
标识
DOI:10.1007/978-1-0716-2922-2_2
摘要

Mitochondria are double membrane-bound eukaryotic organelles with roles in a range of cellular activities including energy conversion, apoptosis, cell signalling, and the biosynthesis of enzyme cofactors. Mitochondria contain their own genome, called mtDNA, which encodes subunits of the oxidative phosphorylation machinery as well as the rRNA and tRNA molecules required for their translation within mitochondria. The ability to isolate highly purified mitochondria from cells has been instrumental in a number of studies of mitochondrial function. Differential centrifugation is a long-established method for the isolation of mitochondria. Cells are subjected to osmotic swelling and disruption, followed by centrifugation in isotonic sucrose solutions to separate mitochondria from other cellular components. We present a method using this principle for the isolation of mitochondria from cultured mammalian cell lines. Mitochondria purified by this method can be further fractionated to investigate protein localization, or act as a starting point to purify mtDNA.
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