Establishment of an Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation System for Hirsutella sinensis

根癌农杆菌 农杆菌 乙酰丁香酮 转化(遗传学) 生物 微生物学 基因 植物 遗传学
作者
Lijuan Wu,Xinkun Hu,Yan Shen,Zenglin Wu,Xuzhong Tang,Lei Xie,Yujie Qiu,Rui Li,Ji Chen,Mengliang Tian
出处
期刊:Current Issues in Molecular Biology [MDPI AG]
卷期号:46 (9): 10618-10632
标识
DOI:10.3390/cimb46090629
摘要

Ophiocordyceps sinensis (Berk.) is a complex is formed by Hepialidae larvae and Hirsutella sinensis. Infestation by H. sinensis, interaction with host larvae, and fruiting body development are three crucial processes affecting the formation of O. sinensis. However, research on the molecular mechanism of O. sinensis formation has been hindered by the lack of effective genetic transformation protocols. Therefore, Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation (ATMT) was adopted to genetically transform two H. sinensis strains and optimize the transformation conditions. The results revealed that the most suitable Agrobacterium strain for H. sinensis transformation was AGL1, and that the surfactant Triton X-100 could also induce ATMT, although less effectively than acetosyringone (AS). In addition, the endogenous promoters of H. sinensis genes had a stronger ability to drive the expression of the target gene than did the exogenous promoter. The optimal transformation conditions were as follows: AS and hygromycin B concentrations of 100 μM and 50 μg/mL, respectively; A. tumefaciens OD600 of 0.4; cocultivation at 18 °C for 24 h; and H. sinensis used within three passages. The results lay a foundation for the functional study of key regulatory genes involved in the formation of O. sinensis.
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