Engineering hybrid genes without the use of restriction enzymes: gene splicing by overlap extension

生物 重叠延伸聚合酶链反应 限制性酶 遗传学 基因 RNA剪接 DNA 计算生物学 聚合酶链反应 分子生物学 核糖核酸
作者
Robert M. Horton,Henry D. Hunt,Steffan N. Ho,Jeffrey K. Pullen,Larry R. Pease
出处
期刊:Gene [Elsevier]
卷期号:77 (1): 61-68 被引量:2932
标识
DOI:10.1016/0378-1119(89)90359-4
摘要

Gene splicing by overlap extension is a new approach for recombining DNA molecules at precise junctions irrespective of nucleotide sequences at the recombination site and without the use of restriction endonucleases or ligase. Fragments from the genes that are to be recombined are generated in separate polymerase chain reactions (PCRs). The primers are designed so that the ends of the products contain complementary sequences. When these PCR products are mixed, denatured, and reannealed, the strands having the matching sequences at their 3' ends overlap and act as primers for each other. Extension of this overlap by DNA polymerase produces a molecule in which the original sequences are 'spliced' together. This technique is used to construct a gene encoding a mosaic fusion protein comprised of parts of two different class-I major histocompatibility genes. This simple and widely applicable approach has significant advantages over standard recombinant DNA techniques.
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