Point-of-Care Testing for Norovirus Typing Using CRISPR/Cas12a Combined with Reverse Transcription Recombinase Polymerase Amplification

重组酶聚合酶扩增 清脆的 诺如病毒 病毒学 打字 生物 聚合酶链反应 计算生物学 爆发 微生物学 遗传学 基因
作者
Tanfen Fang,Ling Zhang,Wei Ding,Yan Liu,Pei Li,Wei Wang,Wei‐Ning Xiang,Bo Wang,Wanping Sun
出处
期刊:Bioconjugate Chemistry [American Chemical Society]
卷期号:34 (6): 1147-1156 被引量:2
标识
DOI:10.1021/acs.bioconjchem.3c00181
摘要

Noroviruses (NoVs) are one of the leading causes of acute gastroenteritis in humans. This study combined reverse transcription recombinase polymerase amplification (RT-RPA) with a clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein (CRISPR/Cas) nucleic acid detection system to develop a point-of-care testing (POCT) technology for typing NoVs. The detection can be completed within 35 min at 37 °C, covering each genotype of genogroup I (GI) and II (GII) NoVs. The sensitivity of this method is 10 copies/μL for GI and 1 copy/μL for GII NoV plasmids. For the detection of clinical samples, the detection results of this method for NoV infected samples are consistent with the RT-qPCR detection method in the laboratory, and this detection method has no cross-reactivity with rotavirus and adenovirus. Therefore, the detection method established in this study enables the diagnosis and screening of suspected patients and close contacts by POCT, which is important for the timely identification and control of NoV outbreaks. In addition, the typing detection of GI and GII NoVs can achieve a precise diagnosis and treatment of patients infected with NoVs.
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