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Base analysis of ribopolynucleotides by chemical tritium labeling: A methodological study with model nucleosides and purified tRNA species

高碘酸盐 多核苷酸 化学 转移RNA 核糖核酸 水解 核苷 核苷酸 色谱法 硼氢化 纸色谱法 有机化学 立体化学 生物化学 催化作用 核物理学 物理 基因
作者
Erika Randerath,Chuan-Tao Yu,Kurt Randerath
出处
期刊:Analytical Biochemistry [Elsevier BV]
卷期号:48 (1): 172-198 被引量:151
标识
DOI:10.1016/0003-2697(72)90181-9
摘要

(1) A method for determining the major and minor base composition of ribopolynucleotides is described, which consists of the following steps: (a) Enzymic digestion of the ribopolynucleotide to a mixture of nucleosides. (b) Oxidation of the digest with periodate. (c) Reduction with tritiated borohydride to labeled nucleoside derivatives. (d) Two-dimensional thin-layer chromatography on cellulose. (e) Liquid scintillation counting. (2) The method is extremely sensitive: tritium-labeled digest derived from less than 1 μg of polynucleotide is required to evaluate the base composition, including most of the so-called minor or modified bases which are natural constituents of RNA. (3) The method has been studied by using both ribonucleosides and tRNA's of known structure as model compounds. (4) Conditions have been chosen for the overall procedure under which RNA constituents are preserved that are partially or completely destroyed under the usual conditions for alkaline hydrolysis of RNA. (5) In the course of this investigation, molar absorptivities were determined for dihydrouridine, 1-methylguanosine, and N2,N2-dimethylguanosine.
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