单管巢式实时 PCR 检测麻风杆菌方法的建立及初步应用

目的：明确单管巢式实时 PCR 检测麻风杆菌的特异性、灵敏性和重复性。方法：以麻风杆菌 hsp18基因为靶基因设计引物和探针，建立单管巢式实时 PCR 方法检测麻风杆菌并与抗酸染色及普通 PCR 进行特异性和灵敏性的比较。结果：单管巢式实时 PCR 检测下限为2.1 fg 质粒 DNA，普通PCR 为21 fg 质粒 DNA，敏感性高10倍；与8种非麻风杆菌无交叉反应；批内相对标准偏差（RSD）为0.24％~1.08％，批间 RSD 为0.09％~2.8％。对比检测54例麻风疑似标本中，抗酸染色、普通 PCR 和单管巢式实时 PCR 的敏感性分别为81.3％（26/32）、87.5％（28/32）和96.9％（31/32）。结论：单管巢式实时 PCR 特异性强、敏感性高且重复性好。