Colorimetric and fluorometric determination of uric acid by a suspension-based assay using enzyme-immobilized micro-sized particles

化学 辣根过氧化物酶 色谱法 尿酸 检出限 荧光 悬挂(拓扑) 荧光计 尿酸氧化酶 生物化学 物理 数学 量子力学 同伦 纯数学
作者
Yukiko Moriiwa,Keigo Hatakeyama,Kazuhiro Morioka,Yasuhiro Inoue,Hiroya Murakami,Norio Teshima,Akio Yanagida,Atsushi Shoji
出处
期刊:Analytical Sciences [Springer Nature]
卷期号:40 (5): 951-958 被引量:2
标识
DOI:10.1007/s44211-024-00556-0
摘要

Daily monitoring of serum uric acid levels is very important to provide appropriate treatment according to the constitution and lifestyle of individual hyperuricemic patients. We have developed a suspension-based assay to measure uric acid by adding a sample solution to the suspension containing micro-sized particles immobilized on uricase and horseradish peroxidase (HRP). In the proposed method, the mediator reaction of uricase, HRP, and uric acid produces resorufin from Amplex red. This resorufin is adsorbed onto enzyme-immobilized micro-sized particles simultaneously with its production, resulting in the red color of the micro-sized particles. The concentration of resorufin on the small surface area of the microscopic particles achieves a colorimetric analysis of uric acid with superior visibility. In addition, ethanol-induced desorption of resorufin allowed quantitative measurement of uric acid using a 96-well fluorescent microplate reader. The limit of detection (3σ) and RSD (n = 3) were estimated to be 2.2 × 10–2 μg/mL and ≤ 12.1%, respectively. This approach could also be applied to a portable fluorometer.
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