Characterization and CRISPR/Cas9-mediated genetic manipulation of neutrophils derived from Hoxb8-ER-immortalized myeloid progenitors

生物 骨髓 髓样 祖细胞 细胞生物学 先天免疫系统 体外 免疫学 免疫系统 干细胞 遗传学
作者
Jeffrey G. Shannon,B. Joseph Hinnebusch
出处
期刊:Journal of Leukocyte Biology [Wiley]
卷期号:114 (1): 42-52 被引量:2
标识
DOI:10.1093/jleuko/qiad036
摘要

Abstract Neutrophils represent a first line of defense against a wide variety of microbial pathogens. Transduction with an estrogen receptor–Hoxb8 transcription factor fusion construct conditionally immortalizes myeloid progenitor cells (NeutPro) capable of differentiation into neutrophils. This system has been very useful for generating large numbers of murine neutrophils for in vitro and in vivo studies. However, some questions remain as to how closely neutrophils derived from these immortalized progenitors reflect primary neutrophils. Here we describe our experience with NeutPro-derived neutrophils as it relates to our studies of Yersinia pestis pathogenesis. NeutPro neutrophils have circular or multilobed nuclei, similar to primary bone marrow neutrophils. Differentiation of neutrophils from NeutPro cells leads to increased expression of CD11b, GR1, CD62L, and Ly6G. However, the NeutPro neutrophils expressed lower levels of Ly6G than bone marrow neutrophils. NeutPro neutrophils produced reactive oxygen species at slightly lower levels than bone marrow neutrophils, and the 2 cell types phagocytosed and killed Y. pestis in vitro to a similar degree. To further demonstrate their utility, we used a nonviral method for nuclear delivery of CRISPR/Cas9 guide RNA complexes to delete genes of interest in NeutPro cells. In summary, we have found these cells to be morphologically and functionally equivalent to primary neutrophils and useful for in vitro assays related to studies of bacterial pathogenesis.

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