The genetic stability of non-replicating recombinant adenoviruses on 293 cells during continuous passage

目的 观察基于AdEasy系统的重组腺病毒在体外连续传代过程中的遗传稳定性.方法 以基于AdEasy系统的4种表达轮状病毒基因的复制缺陷型重组腺病毒为模型,在293细胞上对其进行连续传代20代.每隔5代用PCR方法检测目的基因的存在和回复突变的复制型腺病毒(RCA)的产生,用Western Blot方法检测重组腺病毒携带的目的基因的表达.结果 在20代的连续传代过程中,插入的轮状病毒基因一直稳定存在和表达.重组腺病毒rvAdG2VP7(o)在连续传代15代后,重组腺病毒rvAdGlVP7(o)和rvAdG2VP7(o)在连续传代20代后检测到复制型腺病毒的存在.结论 重组腺病毒在293细胞中连续传代具有良好的遗传稳定性,传代10代以内一般检测不到RCA,可望满足基因治疗药物和腺病毒载体疫苗的研发需要。