Obtaining Mutant Pollen for Phenotypic Analysis and Pollen Tube Dual Staining

雌蕊 花粉 花粉管 生物 表型 孢粉素 发芽 突变体 雄蕊 染色 基因 化学 双受精 配子体 污渍 植物 细胞生物学 胚珠 授粉 遗传学
作者
Sheng Zhong,Zhijuan Wang,Qu Liu
出处
期刊:Methods in molecular biology 卷期号:: 181-190 被引量:3
标识
DOI:10.1007/978-1-0716-0672-8_12
摘要

Mutant phenotype observation is the most useful and important method to study which biological process a gene-of-interest is involved in. In flowering plants, excessive pollen grains land and germinate on the stigma, then pollen tubes grow through the transmitting tract to reach the ovules, eventually enter the micropyle to complete double fertilization. First, for mutants whose homozygotes could not be obtained due to pollen tube defects, it is difficult to observe the defect phenotype since the pollen grains of different genotypes are mixed together. Here, we provide a detailed protocol to pick out mutant pollen grains from the heterozygous mutant plants in Arabidopsis thaliana. By using this method, we could obtain sufficient mutant pollen grains for phenotypic analysis. Second, it is difficult to compare the pollen/pollen tube behavior of two different genotypes/species in vivo in a same pistil. Here, we develop a new dual staining method which combines GUS staining with aniline blue staining. By using this method, we can analyze the competence of the two different pollen tubes in the same pistil.
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