Technical note: Protocol for electrophoretic separation of bovine myosin heavy chain isoforms and comparison to immunohistochemistry analysis1

肌球蛋白 基因亚型 聚丙烯酰胺凝胶电泳 凝胶电泳 免疫组织化学 电泳 生物化学 分子生物学 化学 污渍 生物 色谱法 免疫学 基因
作者
Tracy L. Scheffler,Megan B Leitner,S. Wright
出处
期刊:Journal of Animal Science [Oxford University Press]
卷期号:96 (10): 4306-4312 被引量:15
标识
DOI:10.1093/jas/sky283
摘要

Myosin heavy chain (MyHC) isoform composition is a primary determinant of contractile speed of muscle fibers. Currently, bovine MyHC isoforms are evaluated using time-consuming histochemical analysis by immunflourescence or ATPase activity. Electrophoretic separation of MyHC isoforms is more rapid; however, a reliable procedure without use of gradients has not been validated for cattle. Therefore, our objectives were to develop and validate a procedure for separating bovine MyHC isoforms (I, IIa, and IIx) using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and compare results to immunohistochemistry (IHC) analysis. Muscle samples were collected from masseter, sternomandibularis, diaphragm, longissimus lumborum, and cutaneous trunci within 1.5 h postmortem. To determine appropriate conditions for electrophoretic separation, several parameters of gel composition were varied. Bovine MyHC isoforms were clearly separated by increasing glycerol content of polyacrylamide gels to 37%. Identity of MyHC isoforms was confirmed using western blotting. Percent MyHC composition evaluated by gel electrophoresis was consistent with IHC (P > 0.2). Thus, SDS-PAGE produces clear separation of MyHC isoforms, and is a viable alternative to IHC-based methods.

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