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[高分] 学位论文 丝裂霉素C抗性基因mcrAB在变青链霉菌中的克隆表达及头状链霉菌菌种选育
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马文哲 中国药科大学 摘要：丝裂霉素C（MitomycinC,MMC）属于苯醌类抗肿瘤抗生素,临床上对多种常见的恶性肿瘤具有显著的疗效,自20世纪60年代上市以来,一直被作为一线药物使用.在生产中,发现了贫氧条件下产生菌对MMC的转化作用.为研究有氧条件下MMC转化被抑制的分子机制,我们首次从头状链霉菌中扩增出了MMC抗性基因mcrAB.其测序结果与国外报道的另一丝裂霉素产生菌--淡紫灰链霉菌的mcrAB基因序列进行了比较,在所测序的2031个碱基中,只有5个碱基的差异,表明mcrAB序列是高度保守的.同时,我们还构建了带有mcrAB基因的质粒载体pYG206,将其用原生质体转化法导入变青链霉菌,并在此菌中表达,大大提高了菌体对MMC的抗性,而且在有氧的条件下,不再能转化MMC,与头状链霉菌的表型一致.证实了在有氧条件下,产生菌对MMC的转化作用之所以受到抑制,是因为mcrAB基因表达的蛋白MCRA发挥了氧化酶的作用,维持丝裂霉素C处于无活性的氧化态,进而形成了产生菌的自我保护机制.头状链霉菌原生质体制备是一个较为困难的问题,通过我们的研究建立了其原生质体制备的方法. 关键词： 丝裂霉素C头状链霉菌转化反应抗性基因透明颤菌血红蛋白激光诱变 授予学位： 硕士 学科专业： 微生物与生化药学 导师姓名： 王旻王鲁燕 学位年度： 2002 语种： 中文 分类号： R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）) |
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