Spectroscopic Characterization of Intermediates in the Urate Oxidase Reaction

吸光度 化学 反应速率常数 荧光 反应中间体 尿酸氧化酶 催化作用 分光光度法 反应机理 过氧化物 光化学 反应速率 动力学 色谱法 有机化学 物理 量子力学
作者
Kalju Kahn,Peter A. Tipton
出处
期刊:Biochemistry [American Chemical Society]
卷期号:37 (33): 11651-11659 被引量:112
标识
DOI:10.1021/bi980446g
摘要

The oxidation of urate catalyzed by soybean urate oxidase was studied under single-turnover conditions using stopped-flow absorbance and fluorescence spectrophotometry. Two discrete enzyme-bound intermediates were observed; the first intermediate to form had an absorbance maximum at 295 nm and was assigned to a urate dianion species; the second intermediate had an absorbance maximum at 298 nm and is believed to be urate hydroperoxide. These data are consistent with a catalytic mechanism that involves formation of urate hydroperoxide from O2 and the urate dianion, collapse of the peroxide to form dehydrourate, and hydration of dehydrourate to form the observed product, 5-hydroxyisourate. The rate of formation of the first intermediate was too fast to measure accurately at 20 °C; the second intermediate formed with a rate constant of 32 s-1 and decayed with a rate constant of 6.6 s-1. The product of the reaction, 5-hydroxyisourate, is fluorescent, and its release from the active site occurred with a rate constant of 31 s-1.
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