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Recombineering: a homologous recombination-based method of genetic engineering

重组工程 同源重组 生物 基因组工程 遗传学 基因 基因靶向 计算生物学 体外重组 DNA 基因组 合成生物学 基因组编辑 大肠杆菌 分子克隆 肽序列
作者
Shyam K. Sharan,Lynn C. Thomason,Sergey G. Kuznetsov,Donald L. Court
出处
期刊:Nature Protocols [Springer Nature]
卷期号:4 (2): 206-223 被引量:749
标识
DOI:10.1038/nprot.2008.227
摘要

Recombineering is an efficient method of in vivo genetic engineering applicable to chromosomal as well as episomal replicons in Escherichia coli. This method circumvents the need for most standard in vitro cloning techniques. Recombineering allows construction of DNA molecules with precise junctions without constraints being imposed by restriction enzyme site location. Bacteriophage homologous recombination proteins catalyze these recombineering reactions using double- and single-stranded linear DNA substrates, so-called targeting constructs, introduced by electroporation. Gene knockouts, deletions and point mutations are readily made, gene tags can be inserted and regions of bacterial artificial chromosomes or the E. coli genome can be subcloned by gene retrieval using recombineering. Most of these constructs can be made within about 1 week's time.
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