亲爱的研友该休息了!由于当前在线用户较少,发布求助请尽量完整的填写文献信息,科研通机器人24小时在线,伴您度过漫漫科研夜!身体可是革命的本钱,早点休息,好梦!

Nano-Differential Scanning Fluorimetry for Screening in Fragment-based Lead Discovery

纳米- 背景(考古学) 荧光光谱法 荧光 化学 协议(科学) 纳米技术 片段(逻辑) 生物物理学 生物系统 计算生物学 分析化学(期刊) 色谱法 材料科学 计算机科学 生物 物理 算法 光学 复合材料 古生物学 医学 替代医学 病理
作者
Misbha Ud Din Ahmad,Alexander Fish,Jeroen Molenaar,Sridhar Sreeramulu,Christian Richter,Nadide Altincekic,Harald Schwalbe,Hans Wienk,Anastassis Perrakis
出处
期刊:Journal of Visualized Experiments [MyJoVE Corporation]
卷期号: (171) 被引量:5
标识
DOI:10.3791/62469
摘要

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer composition). The utility of TSA, and specifically of nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF), has been established over the years, both for finding conditions that help stabilize a specific protein and for looking at ligand binding by monitoring changes in the apparent Tm. This paper presents an efficient screening of the Diamond-SGC-iNEXT Poised (DSi-Poised) fragment library (768 compounds) by the use of nano-DSF, monitoring Tm to identify potential fragment binding. The prerequisites regarding protein quality and concentration for performing nano-DSF experiments are briefly outlined followed by a step-by-step protocol that uses a nano-liter robotic dispenser commonly used in structural biology laboratories for preparing the required samples in 96-well plates. The protocol describes how the reagent mixtures are transferred to the capillaries needed for nano-DSF measurements. In addition, this paper provides protocols to measure thermal denaturation (monitoring intrinsic tryptophan fluorescence) and aggregation (monitoring light back-scattering) and the subsequent steps for data transfer and analysis. Finally, screening experiments with three different protein targets are discussed to illustrate the use of this procedure in the context of lead discovery campaigns. The overall principle of the method described can be easily transferred to other fragment libraries or adapted to other instruments.
最长约 10秒,即可获得该文献文件

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
更新
大幅提高文件上传限制,最高150M (2024-4-1)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
Radon完成签到,获得积分10
23秒前
科研通AI2S应助spark810采纳,获得10
24秒前
34秒前
冷傲的山菡完成签到,获得积分10
47秒前
49秒前
1分钟前
科研通AI2S应助spark810采纳,获得10
1分钟前
1分钟前
深情安青应助科研通管家采纳,获得10
1分钟前
华仔应助科研通管家采纳,获得10
1分钟前
打打应助科研通管家采纳,获得10
1分钟前
1分钟前
1分钟前
如沐春风发布了新的文献求助10
1分钟前
Delight完成签到 ,获得积分10
1分钟前
1分钟前
Ray发布了新的文献求助20
1分钟前
飞鱼z完成签到,获得积分10
2分钟前
2分钟前
调皮千兰发布了新的文献求助10
2分钟前
2分钟前
Ray完成签到,获得积分10
2分钟前
2分钟前
今后应助如沐春风采纳,获得10
2分钟前
科研通AI2S应助英勇羿采纳,获得10
2分钟前
无限的曼易完成签到,获得积分20
2分钟前
2分钟前
wanli完成签到,获得积分10
2分钟前
潇洒小松鼠完成签到,获得积分10
2分钟前
2分钟前
橖子小姐完成签到,获得积分10
3分钟前
3分钟前
bjyx发布了新的文献求助10
3分钟前
共享精神应助如沐春风采纳,获得10
3分钟前
3分钟前
汉堡包应助choyng采纳,获得10
3分钟前
归海梦岚完成签到,获得积分10
3分钟前
朱珠贝完成签到,获得积分10
3分钟前
SciGPT应助科研通管家采纳,获得10
3分钟前
bjyx完成签到,获得积分20
3分钟前
高分求助中
Evolution 10000
Sustainability in Tides Chemistry 2800
The Young builders of New china : the visit of the delegation of the WFDY to the Chinese People's Republic 1000
юрские динозавры восточного забайкалья 800
English Wealden Fossils 700
Foreign Policy of the French Second Empire: A Bibliography 500
Chen Hansheng: China’s Last Romantic Revolutionary 500
热门求助领域 (近24小时)
化学 医学 生物 材料科学 工程类 有机化学 生物化学 物理 内科学 纳米技术 计算机科学 化学工程 复合材料 基因 遗传学 催化作用 物理化学 免疫学 量子力学 细胞生物学
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3146703
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 2798015
关于积分的说明 7826470
捐赠科研通 2454516
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1306328
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 627704
版权声明 601522