Comparative analysis of whole blood lysis methods for flow cytometry

流式细胞术 溶解 免疫分型 细胞仪 分子生物学 CD8型 生物 CD3型 染色 全血 化学 免疫学 病理 医学 抗原
作者
Xavier Bossuyt,Gerald E. Marti,Thomas A. Fleisher
出处
期刊:Cytometry [Wiley]
卷期号:30 (3): 124-133 被引量:99
标识
DOI:10.1002/(sici)1097-0320(19970615)30:3<124::aid-cyto3>3.0.co;2-l
摘要

We performed a parallel evaluation of six whole blood lysis methods comparing light scatter and quantitative fluorescence intensity based on quantitative flow cytometry, of selected lymphocyte subsets and CD34+ cells. Leukocytes prepared with FACS Lysing Solution (BDIS), Immunolyse (Coulter) and Optilyse B (Immunotech) consistently gave lower forward scatter values than those prepared with ACK (BioWhitaker), Ortho-mune (Ortho) and ImmunoPrep (Coulter). Debris, defined as CD45 negative events with the threshold off, accounted approximately 80% of all events with ACK and Ortho-mune. The other lysing methods consistently yielded less debris (approximately 50%) with Immunolyse generating only approximately 16% debris. Optilyse and FACS lyse consistently displayed the lowest percentage of lymphoid cells (CD45+/CD14-) in the three part differential. The percentage of CD3+, CD20+, CD5+, and CD16/CD56+ cells was consistent with all methods but CD4 and CD8 determinants showed inconsistent variation with ACK and Ortho-mune. In addition, the fluorescence intensity of CD14 PE and CD8 PE staining was markedly decreased on cells prepared with ImmunoPrep. Finally, the clearest separation of CD34+ cells was observed with ACK and Ortho-mune. Our data demonstrate that the method used for red cell lysis can have definite impact on immunophenotyping and selected methods appear to be more suitable for specific applications.
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